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生化儀的測(cè)定原理是基于朗伯比爾定律，對(duì)患者標(biāo)本+試劑的反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，儀器只會(huì)得到一個(gè)吸光度，而我們所需要的是物質(zhì)的濃度等，因此需要將吸光度換算成濃度才具有臨床意義。那么就需要將儀器所檢測(cè)到的吸光度與物質(zhì)的濃度建立一定的關(guān)系。

校準(zhǔn)的過程就是用生化儀去檢測(cè)已知一定濃度的校準(zhǔn)品，得到對(duì)應(yīng)的吸光度，將吸光度與已知濃度的校準(zhǔn)品的濃度進(jìn)行曲線擬合，得到物質(zhì)濃度和吸光度之間的關(guān)系曲線即校準(zhǔn)曲線，那么我們將生化儀檢測(cè)到的患者標(biāo)本+對(duì)應(yīng)試劑反應(yīng)的吸光度帶入校準(zhǔn)曲線中，就可以得到患者標(biāo)本相應(yīng)物質(zhì)的濃度了。

簡(jiǎn)單的說，就比如去市場(chǎng)買西瓜，賣瓜的告訴你，這個(gè)瓜是10斤，那我說是20斤，那么怎么判定是10斤而不是20斤的呢，這就是需要對(duì)1斤進(jìn)行定義，把一定的重量定義為1斤，那么稱重的時(shí)候是10倍，顯然得出的是10斤而不是20斤了。

如果不校準(zhǔn)，儀器檢測(cè)僅有吸光度，這個(gè)吸光度沒辦法換算為濃度，也就沒辦法得到患者標(biāo)本的結(jié)果了。

這是因?yàn)椴煌�的�?xiàng)目，試劑廠家制定了不同的校準(zhǔn)類型，目前科室中主要采取的有兩點(diǎn)校準(zhǔn)和多點(diǎn)校準(zhǔn)；兩點(diǎn)校準(zhǔn)一般是以水為零點(diǎn)，校準(zhǔn)品為另外一個(gè)點(diǎn)，以直線Y=aX+b建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；多點(diǎn)校準(zhǔn)的就需要拿好幾個(gè)校準(zhǔn)品，科室兩臺(tái)生化儀器主要采用的是樣條函數(shù)法（spline）和對(duì)數(shù)曲線（Logit-Log4P、Logit-Log5P）。

目前科室的尿素、乳酸脫氫酶、α-羥丁酸脫氫酶等項(xiàng)目相對(duì)穩(wěn)定性較差，血清總蛋白、電解質(zhì)鉀鈉氯等，由于正常情況下在體內(nèi)波動(dòng)相對(duì)較小，加上國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T20470-2006）（血清總蛋白允許TEa≤5，血清鉀≤6%，鈉、氯≤4%）相對(duì)較嚴(yán)苛，為了保證質(zhì)量，更好的滿足于臨床需求，因此需加強(qiáng)校準(zhǔn)；而像胱抑素C、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等項(xiàng)目穩(wěn)定性較好，在質(zhì)控穩(wěn)定以及試劑批號(hào)未更換的情況下會(huì)延長(zhǎng)校準(zhǔn)的周期。

你是想表達(dá)的是明明是同一個(gè)校準(zhǔn)品，那么校準(zhǔn)品里面的總蛋白等濃度應(yīng)該是一樣的對(duì)吧?

這點(diǎn)要注意，我們用的校準(zhǔn)品上總蛋白的標(biāo)示值并不是總蛋白的真實(shí)濃度，同一個(gè)校準(zhǔn)品那么總蛋白的濃度那肯定是一樣的，但是校準(zhǔn)品只是用于校正系統(tǒng)的，是用于修正不同廠商對(duì)儀器參數(shù)設(shè)置的不同和不同試劑制造商試劑組分的區(qū)別的。我們臨床實(shí)驗(yàn)室的最終目的是要讓患者的結(jié)果在不同檢測(cè)系統(tǒng)（儀器和試劑的組合）上具有可比性，故而校準(zhǔn)品的值就可能因不同儀器與試劑組合的不同而不同。

這個(gè)問題對(duì)于你們可能有點(diǎn)復(fù)雜，一般項(xiàng)目結(jié)果溯源最好是溯源到參考方法甚至決定性方法。例如：為某試劑商的校準(zhǔn)品中葡萄糖賦值，如果直接用參考方法檢測(cè)校準(zhǔn)品中葡萄糖的濃度，得到的會(huì)是該校準(zhǔn)品中葡萄糖的真實(shí)濃度，但若是用此結(jié)果直接校準(zhǔn)臨床實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)系統(tǒng)后得到的患者標(biāo)本結(jié)果將可能是不可靠的，因?yàn)樾��?zhǔn)品畢竟是試劑商制造，與實(shí)際臨床標(biāo)本是有很大差異的，我們最終是服務(wù)于臨床患者標(biāo)本，兩者之間可能會(huì)因基質(zhì)效應(yīng)的存在，導(dǎo)致校準(zhǔn)后所測(cè)患者標(biāo)本結(jié)果不可靠，而用參考方法檢測(cè)該校準(zhǔn)品中葡萄糖的值可以作為初始賦值。接下來就是重點(diǎn)了：

為了克服基質(zhì)效應(yīng)的存在，可選擇一組患者標(biāo)本至少5個(gè)以上不同濃度，用參考方法去檢測(cè)這一組患者標(biāo)本，同時(shí)用校準(zhǔn)品經(jīng)參考方法檢測(cè)得到的初始賦值去校準(zhǔn)我們臨床實(shí)驗(yàn)室使用的檢測(cè)系統(tǒng)，再去檢測(cè)這同一組患者標(biāo)本，兩組數(shù)據(jù)作線性回歸，得到的相關(guān)系數(shù)、斜率、截距等均可接受，那么校準(zhǔn)品賦值就完成了。

但是由于校準(zhǔn)品與臨床患者標(biāo)本基質(zhì)的區(qū)別，加上在國內(nèi)市場(chǎng)上儀器與試劑的搭配組合各異，往往結(jié)果是不可接受的，那么就需要根據(jù)回歸曲線調(diào)整校準(zhǔn)品的值，直至可接受為止，因此當(dāng)使用不同組合的檢測(cè)系統(tǒng)，校準(zhǔn)品需根據(jù)相應(yīng)的系統(tǒng)進(jìn)行賦值，這也就解釋了為什么同一個(gè)校準(zhǔn)品在不同的檢測(cè)系統(tǒng)中的標(biāo)示值不一樣了。當(dāng)然，如果被賦值校準(zhǔn)品的基質(zhì)與臨床標(biāo)本差異較大，那么有可能是無法調(diào)整的。

冷凍干燥能極大的延長(zhǎng)校準(zhǔn)品的有效期，方便儲(chǔ)存和運(yùn)輸并且校準(zhǔn)品要求基質(zhì)與臨床患者標(biāo)本盡可能的相似，因此在制作中添加物質(zhì)不能過多，添加的穩(wěn)定劑成分越多，那么導(dǎo)致的基質(zhì)效應(yīng)可能會(huì)越明顯。質(zhì)控品要求較高的穩(wěn)定性，需添加較多的穩(wěn)定性以保證質(zhì)控品成分的穩(wěn)定，因此質(zhì)控品可以采用液體也能有較長(zhǎng)的有效期，當(dāng)然質(zhì)控品采用干粉儲(chǔ)存效期一般會(huì)更長(zhǎng)。兩者對(duì)于臨床實(shí)驗(yàn)室的作用不一樣，就用不同的方式運(yùn)輸儲(chǔ)存了。

也不是所有的校準(zhǔn)品都是需要配制的，有些項(xiàng)目在液體狀態(tài)下有較好穩(wěn)定性，像胱抑素C、超敏C-反應(yīng)蛋白等，試劑廠家會(huì)直接包裝為液體校準(zhǔn)品使用的，一般我們需要配制的主要是復(fù)合校準(zhǔn)品、載脂蛋白AI、載脂蛋白B等，在配制前，先仔細(xì)閱讀校準(zhǔn)品的使用說明書，了解配制、混勻的注意事項(xiàng)，然后按照說明書的要求吸取需要的去離子水的量進(jìn)行配制，可以使用A級(jí)以上的移液管吸樣，也可采用定期校準(zhǔn)的具有較高精度的加樣槍進(jìn)行配制，目前好的加樣槍最大吸液量程處誤差可在0.6%以下，相比用移液管配制誤差還更小。

但是既是人為，那么誤差就不好估計(jì)，那么怎么來評(píng)估存在的誤差呢？當(dāng)按要求配制好校準(zhǔn)品，照說明書要求混勻后，在檢測(cè)系統(tǒng)穩(wěn)定的情況下，可把校準(zhǔn)品當(dāng)標(biāo)本反測(cè)，用于估計(jì)配制所產(chǎn)生的誤差大小。這樣即使配制過程存在一定的誤差，我們也可以在校準(zhǔn)品不確定度允許的范圍內(nèi)修正校準(zhǔn)品的標(biāo)示值。

K=2，實(shí)際上代表的是取2標(biāo)準(zhǔn)差約95%的可信程度，因?yàn)樵诮o校準(zhǔn)品賦值的過程中，可能會(huì)經(jīng)過很多次的調(diào)整，而檢測(cè)系統(tǒng)會(huì)存在一個(gè)固有誤差，可能因加樣、溫度環(huán)境變化而導(dǎo)致，這個(gè)誤差可以通過多次檢測(cè)大致確定一個(gè)范圍，一般臨床上大多采用95%的置信區(qū)間。

儀器開始校準(zhǔn)前，確保校準(zhǔn)品的標(biāo)示值以及校準(zhǔn)品所放置的位置正確，將校準(zhǔn)品加入生化專用杯時(shí)要避免氣泡的產(chǎn)生，查看需要校準(zhǔn)項(xiàng)目的校準(zhǔn)因子即K值并記錄（一定要記錄，科室每次校準(zhǔn)的K值都會(huì)記錄保存，便于查看總結(jié)），儀器校準(zhǔn)結(jié)果出來后，查看校準(zhǔn)的曲線和校準(zhǔn)數(shù)據(jù)，一般生化儀器的校準(zhǔn)在每個(gè)濃度水平都會(huì)進(jìn)行兩次吸樣,要注意觀察兩次吸樣校準(zhǔn)之間吸光度的差異，一般儀器狀態(tài)良好，校準(zhǔn)品未變質(zhì)的情況下，每個(gè)濃度點(diǎn)上對(duì)應(yīng)的兩次吸光度的結(jié)果應(yīng)是差異不大的，即校準(zhǔn)曲線圖上同一個(gè)濃度上的兩個(gè)吸光度的點(diǎn)基本上是很接近的。

對(duì)于兩點(diǎn)校準(zhǔn)來說，如果校準(zhǔn)的試劑批號(hào)未更換，那么校準(zhǔn)前后K值即斜率差異也是不大的。如果校準(zhǔn)前后K值差異較大，那就需要再次核查校準(zhǔn)的情況，比如校準(zhǔn)品的標(biāo)示值、放置位置是否正確，放入生化杯的校準(zhǔn)液是否存有氣泡，儀器狀態(tài)，水機(jī)的水質(zhì)等情況后再次校準(zhǔn)，得到校準(zhǔn)后的K值與第一次校準(zhǔn)時(shí)記錄的K值差異不大時(shí)，那么說明校準(zhǔn)就成功了。

生化的很多常規(guī)項(xiàng)目在試劑廠商未進(jìn)行試劑升級(jí)的情況下，一般即使更換新批號(hào)試劑K值變化也不會(huì)太大，但當(dāng)發(fā)現(xiàn)K值變化較大，而我們又確認(rèn)校準(zhǔn)過程、儀器狀態(tài)沒問題時(shí)，我們就需要比對(duì)患者樣品了，選取5例具有濃度梯度的患者標(biāo)本（選取患者標(biāo)本對(duì)比的時(shí)候還應(yīng)注意對(duì)應(yīng)項(xiàng)目在患者標(biāo)本中的穩(wěn)定性），進(jìn)行結(jié)果的比對(duì)（儀器穩(wěn)定時(shí)檢測(cè)的患者結(jié)果與校準(zhǔn)后檢測(cè)的患者結(jié)果比對(duì)或是有多臺(tái)儀器時(shí)，用另一臺(tái)儀器穩(wěn)定時(shí)檢測(cè)患者的結(jié)果與校準(zhǔn)后檢測(cè)的患者結(jié)果比對(duì)），如果比對(duì)的結(jié)果可接受（最好滿足行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的1/3TEa內(nèi)）那么說明校準(zhǔn)是成功的。

另外，如血糖等不穩(wěn)定的項(xiàng)目，還可在校準(zhǔn)后用正確度控制品進(jìn)行校準(zhǔn)結(jié)果的評(píng)價(jià)，以確保校準(zhǔn)的可靠性。此處最好不用質(zhì)控去判斷校準(zhǔn)結(jié)果，質(zhì)控品跟患者標(biāo)本可能存在較大的基質(zhì)效應(yīng)，以質(zhì)控去判斷校準(zhǔn)結(jié)果會(huì)誤導(dǎo)操作老師，導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的患者結(jié)果。這是基于目前國內(nèi)試劑生產(chǎn)商在對(duì)試劑進(jìn)行改良升級(jí)，更換新批號(hào)試劑時(shí)，新批號(hào)試劑可能由于改良升級(jí)，導(dǎo)致質(zhì)控出現(xiàn)失控，而患者標(biāo)本卻并未有明顯改變的情況。

多點(diǎn)校準(zhǔn)可以通過查看校準(zhǔn)曲線和校準(zhǔn)數(shù)據(jù)，即校準(zhǔn)曲線上同一濃度上兩次吸樣檢測(cè)的吸光度的點(diǎn)都很接近甚至重合在一起，校準(zhǔn)項(xiàng)目吸光度變化呈遞增關(guān)系且吸光度變化有一定比例關(guān)系，可采用比對(duì)患者結(jié)果的方式進(jìn)行校準(zhǔn)結(jié)果的確認(rèn)，質(zhì)控有時(shí)候只能代表質(zhì)控物所在水平點(diǎn)的值可能未發(fā)生明顯變化，并不能代表整個(gè)結(jié)果區(qū)間患者樣品的結(jié)果，因此最好校準(zhǔn)后選取具有代表性的患者標(biāo)本結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，必要時(shí)需修正質(zhì)控品的靶值。綜上，基本就可以判斷校準(zhǔn)是否成功了。