|
|
本文轉(zhuǎn)載自朱元祺 定向點(diǎn)金 金寶
1. 基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜 （MALDI-TOF MS） 質(zhì)譜除了用于快速鑒定臨床分離的病原體外，其檢測AST的方法也有一定的價(jià)值。已報(bào)道的方法有: （1）測抗生素水解酶（如β-內(nèi)酰胺酶）的活性。（2）確認(rèn)是否存在指示抗藥性（例如vanA，mecA或NDM-1）的PCR產(chǎn)物。（3）是否存在與藥敏變化相關(guān)的抗菌藥物的情況下，觀察細(xì)菌蛋白質(zhì)譜的變化。 2. 流式細(xì)胞儀 （Flow cytometry，F(xiàn)C） 流式細(xì)胞熒光技術(shù)藥敏試驗(yàn) （FCST）則是根據(jù)FC所檢測到的熒光強(qiáng)度來判斷經(jīng)藥物處理后的培養(yǎng)液中細(xì)菌的存活率，從而預(yù)測某種藥物對特定病原體感染的治療效果。FCST常用的三種熒光染料分別為膜非滲透性、膜滲透性和膜電位敏感性。 3. 振動懸臂稱重微生物細(xì)胞 （Microbial cell weighing by vibrating cantilevers） 懸臂包含有助于微生物通過的小管道，并可以使其不斷振動。當(dāng)細(xì)菌通過時(shí)，它們的重量（在飛克范圍內(nèi)）將導(dǎo)致懸臂運(yùn)動的頻率發(fā)生變化。密度較低的細(xì)胞與密度較高的細(xì)胞會引起不同的變化。當(dāng)用抗菌劑處理細(xì)菌時(shí)，其浮力質(zhì)量密度會發(fā)生變化并可以被測量。懸臂可以使用納米技術(shù)進(jìn)行多路復(fù)用，從而可以同時(shí)針對單個生長培養(yǎng)物測試不同濃度的多種抗生素。懸臂技術(shù)也被曾用于評估萬古霉素與細(xì)胞壁前體的結(jié)合和測量多粘菌素對銅綠假單胞菌的影響作用。 4 . 等溫微量熱法 （IMC） 使用IMC進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)并不是新的方法，已有成功應(yīng)用于細(xì)菌AST的報(bào)道。如分枝桿菌，包括結(jié)核分枝桿菌和真菌。當(dāng)使用一段時(shí)間內(nèi)的凈熱量作為細(xì)菌生長的替代指標(biāo)時(shí)，IMC與BMD方法以及與CLSI和/或EUCAST的折點(diǎn)有良好的相關(guān)性。另外，IMC可用于評估抗微生物藥物的協(xié)同作用。 5. 磁珠旋轉(zhuǎn) (Magnetic bead rotation) 基于異步磁珠旋轉(zhuǎn) （AMBR）生物傳感器的生長抗菌藥敏性試驗(yàn)已經(jīng)被報(bào)道。在這個系統(tǒng)中，隨著細(xì)菌的生長，可以觀察到細(xì)菌對旋轉(zhuǎn)磁場中自組裝磁性微珠簇的旋轉(zhuǎn)和形狀的影響。 6. 微滴中測試 （Testing in microdroplets） 最近，制備了含有單個細(xì)菌細(xì)胞的液滴。這一技術(shù)可以小型化，并且對每個細(xì)菌的抗生素測試的數(shù)量容易多路復(fù)用，而且測試的持續(xù)時(shí)間可以短到一個或幾個細(xì)菌復(fù)制周期。 顯然，在將這種方法作為一種常規(guī)AST工具進(jìn)行評估之前，有必要對技術(shù)重復(fù)性進(jìn)行評估，并開發(fā)足夠的參考MIC數(shù)據(jù)庫。 基于噬菌體的策略已成功地適用于結(jié)核分枝桿菌的檢測，并通過加入包含熒光素酶基因的重組噬菌體實(shí)現(xiàn)了優(yōu)化。結(jié)果表明，熒光素酶測定可以在2天之內(nèi)以低成本進(jìn)行，并可以成功地應(yīng)用于發(fā)展中國家的實(shí)驗(yàn)室。然而，盡管某些創(chuàng)新方法似乎很有希望，但尚未獲得廣泛的接受。 實(shí)時(shí)顯微鏡是創(chuàng)新技術(shù)之一，在不久的將來可能應(yīng)用于AST�；诟叻直媛氏鄼C(jī)系統(tǒng)的儀器已經(jīng)商業(yè)化，并且顯示出很高的效率。該技術(shù)已拓展應(yīng)用于在有或無抗生素的情況下觀察微菌落和系列攝影，可為陽性血液培養(yǎng)瓶中的細(xì)菌做到“1天AST”。這表明看似簡單、老式的檢測形式仍然可以改造成能更好地滿足患者需求的自動化系統(tǒng)。但是，需要注意的是，對于所有AST的未來技術(shù)方法，其數(shù)據(jù)庫開發(fā)尚未完成，而且這些技術(shù)的前景目前仍然不十分明朗。 常規(guī)AST有其診斷局限性，通常耗時(shí)且測試結(jié)果滯后,盡管其方法非�？煽亢蛡涫芡瞥纾ǔＲ灿蠧E(Conformite Europeenne)和FDA(Food and Drug Administration) 認(rèn)證。AST新技術(shù)可以快速和自動化， 但任何AST新技術(shù)都必須與當(dāng)前的參考標(biāo)準(zhǔn)方法（BMD）相比對，然而，呈現(xiàn)出顯著改進(jìn)的方法目前尚未見報(bào)道。但是，正如我們所綜述的，未來幾種簡單、快速、穩(wěn)定和特異的AST方法可能很快就會出現(xiàn)。
|
