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本文轉(zhuǎn)載自檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)網(wǎng) PCR類的方法與核酸檢測實(shí)驗(yàn)室的核酸氣溶膠污染就像一個硬幣的兩面，我們只能選擇都要或者都不要，而無法選擇要字還是要花。
可是對于從事核酸檢測的實(shí)驗(yàn)室人員來說，內(nèi)心一直渴望一種終極的核酸氣溶膠污染解決方案：對核酸氣溶膠污染的房間進(jìn)行空氣核酸清除。這個實(shí)驗(yàn)我從構(gòu)思到斷斷續(xù)續(xù)的實(shí)驗(yàn)用了差不多1年的時間，這期間也有和很多朋友進(jìn)行交流，最終形成下面的實(shí)驗(yàn)方案。 一、DNA去除劑的篩選 要實(shí)現(xiàn)核酸氣溶膠污染的空間清除，首先要篩選出在液體狀態(tài)下可以去除核酸的DNA去除劑。因?yàn)檎嬲苡玫腄NA去除劑也不多。 本次試驗(yàn)將經(jīng)過數(shù)字PCR定量的100 copies/μL （CT約為31）ASFV質(zhì)粒與DNA去除劑按照等體積混合，室溫分別作用10min、20min和30min，進(jìn)行核酸提取后，進(jìn)行qPCR擴(kuò)增，與質(zhì)粒和水混合的陽性對照進(jìn)行比較。由于并非同一次實(shí)驗(yàn)完成，所以結(jié)果之間可能存在一定的偏差，但是不影響試驗(yàn)的結(jié)論。到目前為止我一共評價了10種市售DNA去除劑產(chǎn)品，只有1號、6號和8號產(chǎn)品在液體狀態(tài)下可有效降解質(zhì)粒DNA，其他產(chǎn)品幾乎無任何效果。 表1 市售DNA去除劑的核酸去除效果 二、常用消毒劑的DNA去除效果實(shí)驗(yàn) 1、常用消毒劑的篩選 實(shí)驗(yàn)室中常用的消毒劑種類眾多：醛類、酚類、醇類、季銨鹽類、過氧化物、氯制劑以及酸堿，這些消毒劑對微生物的消毒效果已經(jīng)經(jīng)過充分的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，但是對于核酸的降解效果尚沒有充分的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。對于核酸檢測實(shí)驗(yàn)室需要一種既對微生物的消毒效果好同時又能降解DNA的消毒劑。試驗(yàn)結(jié)果表明，僅84消毒液和三氯異氰尿酸兩種氯制劑和1 M鹽酸符合要求。由于1 M鹽酸具有較強(qiáng)的腐蝕性，重點(diǎn)推薦氯制劑作為核酸檢測實(shí)驗(yàn)室的廢棄物處理，但是氯制劑具有金屬腐蝕性，不能用于儀器設(shè)備的消毒。 表2 不同類型消毒劑的DNA去除效果 2、氯制劑的最低有效濃度 氯制劑類消毒液具有強(qiáng)大的DNA降解作用，但是由于其有金屬腐蝕性和刺激性，使用時可用于清潔地面，非金屬臺面以及浸泡吸頭、離心管等試驗(yàn)物品。 根據(jù)《新冠肺炎疫情消毒技術(shù)指南 》：污染物（患者血液、分泌物和嘔吐物）有效氯 5g/L-10g/L 的含氯消毒液；地面、墻壁、物體表面使用有效氯 1g/L 的含氯消毒液；衣服、被褥等紡織品先用有效氯 0.5g/L 的含氯消毒液浸泡 30 分鐘，然后按常規(guī)清洗。 表3 氯制劑消毒液不同濃度的DNA去除效果 試驗(yàn)結(jié)果表明：作用5min時，有效氯濃度大于等于1.2 g/L的含氯消毒液，可將100 copies/μL質(zhì)粒完全降解。作用10min時，有效氯濃度大于等于0.6 g/L的84消毒液，可將100 copies/μL質(zhì)粒完全降解。
三、核酸氣溶膠污染的空氣清除實(shí)驗(yàn)
核酸氣溶膠污染的空氣清除實(shí)驗(yàn)如何做呢？ 大部分想到的都是造一個氣溶膠污染的環(huán)境然后進(jìn)行清除，或者是污染之后進(jìn)行核酸清除。對于我來說一個無法重復(fù)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果無法定量分析的實(shí)驗(yàn)是沒有意義的，所以我借鑒了消毒劑空氣消毒的一些方法。參見《GB27948-2020 空氣消毒劑通用要求》和《消毒技術(shù)規(guī)范》。 1.試驗(yàn)材料 （1）DNA去除劑：本次試驗(yàn)共選擇了表1中6和8兩款市售DNA去除劑。 （2）測試質(zhì)粒：由于考慮到大部分實(shí)驗(yàn)室污染的CT值都會高于30，因此本次使用的ASFV基因質(zhì)粒濃度約為100 copies/μL，熒光定量PCR CT約為 31.07 。將質(zhì)粒加到植絨棉簽上風(fēng)干。 （3）由深圳潤聯(lián)環(huán)�？萍加邢薰居亚橹С值谋攘挚茲hKVBOX消毒儀，該儀器配合過氧化氫消毒液具有優(yōu)異的空氣消毒性能，可有效殺滅芽孢等微生物。 （4）約0.1立方米的密閉傳遞窗。 2.試驗(yàn)方法 消毒機(jī)上設(shè)置消毒液的量為10ml，濃度為100 ml/m3，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于《GB27948-2020 空氣消毒劑通用要求》：使用氣溶膠噴霧消毒時，消毒劑用量應(yīng)≤10 ml/m3。 噴霧后密閉2h，之后將加有質(zhì)粒的植絨拭子用TE洗脫，同時設(shè)未經(jīng)熏蒸的加有質(zhì)粒的植絨拭子作為對照。使用熒光定量PCR方法進(jìn)行檢測。 表4 空氣核酸去除試驗(yàn)結(jié)果 3.試驗(yàn)結(jié)果 2種液體狀態(tài)下可以有效降解質(zhì)粒的DNA去除劑在空氣核酸清除實(shí)驗(yàn)中完全沒有效果。我很期待能找到一種可以用于空氣中核酸氣溶膠污染去除的方案來徹底地解決核酸檢測實(shí)驗(yàn)室的核酸氣溶膠污染的問題，但是暫時沒有找到這樣的產(chǎn)品。我相信未來一定會有高性能的核酸去除劑能用于空氣核酸去除。 四、放棄幻想，預(yù)防為主
無論各個公司如何吹噓自己的核酸去除產(chǎn)品，我建議廣大從事核酸檢測的朋友們放棄一勞永逸的幻想，認(rèn)清現(xiàn)實(shí)：核酸氣溶膠污染的空氣清除難度很大，還是扎扎實(shí)實(shí)的做好預(yù)防措施和日常的監(jiān)測工作吧！ 來源：原博士帶你做檢測 |