作者：路鑫暢 吳萬(wàn)通 董慧 李忠信
干血滴（Dried Blood Spots DBS）由少量體積的毛細(xì)管血液沉積到專用的紙質(zhì)卡上構(gòu)成。該技術(shù)源于60年前新生兒篩查（Newborn Screening NBS）苯丙酮尿癥時(shí)的細(xì)菌抑制試驗(yàn)。2013年美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究院（CLSI）發(fā)布了“濾紙上采集血液用于新生兒篩查計(jì)劃標(biāo)準(zhǔn)第六版”。干血滴還適用于新生兒篩查、興奮劑檢測(cè)、工作場(chǎng)所藥物試驗(yàn)、法醫(yī)篩查、直接酒精標(biāo)志物分析、抗逆轉(zhuǎn)病毒藥物、抗癲癇藥物和劑量藥物管理等。本文對(duì)干血滴標(biāo)本采集和應(yīng)用前景做此綜述。1. 在臨床研究中，成年人靜脈采血、手指刺傷是首選的采樣模式。
2. 新生兒篩查，從足跟采集的血液是NBS的首選血液，應(yīng)在足跟最內(nèi)側(cè)或外側(cè)靠近足底面的部位采集。
3. 采血裝備：濾紙采血的濾紙規(guī)格。濾紙應(yīng)由100%純棉短棉絨制成，不含濕強(qiáng)度添加劑；基重應(yīng)為179克/平方米，24英寸×36英寸；pH值應(yīng)為5.7至7.5（檢測(cè)方法為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織ISO-6588-11）；灰分：最大1%。濾紙采集卡上應(yīng)注明的中文信息：新生兒的姓名，性別，出生日期，初生重，胎齡，母親的姓名，病歷號(hào)，標(biāo)本采集日期。
4. 血斑干燥：避免觸摸或涂抹血斑。讓血液樣本在水平、非吸收性、開放表面上，在18至25℃的環(huán)境溫度下風(fēng)干至少3小時(shí)。如下圖所示：
5. 采集中質(zhì)量保證：處理樣本采集設(shè)備（卡）時(shí)應(yīng)使用無(wú)粉末手套。確保樣本采集設(shè)備（卡）的有效期未過(guò)。手動(dòng)或通過(guò)電子方式填寫標(biāo)本采集設(shè)備（卡）人口統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)部分要求的患者信息。在手動(dòng)應(yīng)用中，應(yīng)該使用圓珠筆，因?yàn)檐浌P不會(huì)復(fù)制到其他紙張上。除非處理過(guò)程確�；颊咝畔⒉槐徽趽跚也裳獏^(qū)域不受影響，否則不得使用地址印記設(shè)備（或膠粘標(biāo)簽）。請(qǐng)勿使用可能會(huì)壓縮濾紙或樣本采集設(shè)備（卡）濾紙段的打字機(jī)或打印機(jī)。在采集樣本（血斑）之前、期間和之后，避免觸摸濾紙（樣本采集設(shè)備[卡]）部分圓圈內(nèi)的區(qū)域，因?yàn)槭纸佑|到的油和其他物質(zhì)可能會(huì)影響或污染樣本、樣本采集設(shè)備（卡）或?yàn)V紙。在使用之前或之后，不要讓水、喂食配方、防腐溶液、手套粉末、洗手液或其他材料接觸濾紙片或樣本采集設(shè)備（卡）。
6. 血斑質(zhì)量的判定：
1. 血液藥物分析：2014年Regina V Oliveira氏等應(yīng)用液相色譜/高分辨率準(zhǔn)確性質(zhì)譜儀（LC/HRAMS）共軛自動(dòng)化系統(tǒng)直接提取DBS用于定量人血液咪達(dá)唑倉(cāng)（MDZ）和α-羥基咪達(dá)唑倉(cāng)（α-OHMDZ）。
2021年意大利學(xué)者Lucia Mainero Rocca氏等報(bào)道了“一種稀釋和快速液相色譜質(zhì)譜方法分析預(yù)切干血滴中多種藥物”，藥物可影響聽覺(jué)和神經(jīng)系統(tǒng)，由于病理學(xué)觀點(diǎn)不同而被內(nèi)耗，在工作環(huán)境中風(fēng)險(xiǎn)的源頭又被提出。在呈現(xiàn)的課題中所涉及到的所有靶成分顯示毒性或發(fā)作性睡眠病副作用，基于這些理由，職業(yè)安全組織已經(jīng)認(rèn)可它們作為工傷潛在原因。開發(fā)并確認(rèn)多種方法用于最普遍廣泛的15種藥物的分析（屬于9種不同類別包括抗組胺劑類、貝塔洛克類、抗抑郁藥、Z-藥和類罌粟堿）。
2021年沙特阿拉伯學(xué)者Bushra等報(bào)道“一個(gè)簡(jiǎn)單靈敏的干血滴定量甲福明二甲雙胍的LC-MS/MS方法”甲福明二甲雙胍具有改善胰島素抵抗減少肝臟葡萄糖產(chǎn)生從而降低血糖作用
2. 興奮劑檢測(cè)：
2020年瑞士學(xué)者Olivier Salamin氏等開發(fā)了一種干血滴樣本采集及隨后用LC-MS分析的制備方法用于快速檢測(cè)血液樣本中反胺苯環(huán)醇及其它的兩個(gè)主要代謝物，同年來(lái)自瑞士伯爾尼大學(xué)伯爾尼法醫(yī)研究所的Marc Luginbühl氏等報(bào)道世界反服用禁藥政府組織（WADA）和國(guó)際檢測(cè)機(jī)構(gòu)（ITA）最近宣布開發(fā)并落實(shí)了干血滴試驗(yàn)在北京2022年冬季奧林匹克運(yùn)動(dòng)會(huì)和殘奧會(huì)比賽中用于常規(guī)分析。
3. 新生兒篩查：孫云等采用非衍生化串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)干血濾紙片氨基酸、酰基肉堿和琥珀酰丙酮，報(bào)告南京地區(qū)新生兒氨基酸、有機(jī)酸和脂肪酸代謝病總發(fā)病率分別為0.0199%、0.0068%和0.0085%。
近幾年來(lái)干血滴技術(shù)因其具有較大的優(yōu)勢(shì)得到了迅速發(fā)展。5年前，干血滴用于小分子分析的科學(xué)文獻(xiàn)很少�，F(xiàn)在，可以獲得的科學(xué)文獻(xiàn)很多，一些雜志甚至專門刊登干血滴技術(shù)的文章。自動(dòng)化和技術(shù)的進(jìn)步將進(jìn)一步促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室干血滴方法的廣泛應(yīng)用。盡管采用這種技術(shù)在改善、減少和替代藥物開發(fā)中動(dòng)物的使用三個(gè)方面具有明顯優(yōu)勢(shì)，然而，干血滴方法的開發(fā)和分析仍然漫長(zhǎng)而耗時(shí)。未來(lái)，干血滴的自動(dòng)化和直接分析將加快這一進(jìn)程。
