本文轉(zhuǎn)載自曲昌華 定向點(diǎn)金 金寶
本文基于自身抗體的檢測需求及臨床應(yīng)用現(xiàn)狀，對國內(nèi)新興的自身抗體多重自動化技術(shù)進(jìn)行介紹，展望未來自身抗體的檢測趨勢。1、流式熒光技術(shù)原理：流式熒光技術(shù)又稱液相懸浮芯片技術(shù)、多功能流式點(diǎn)陣技術(shù)、液相芯片分析技術(shù)、xMAP技術(shù)等。該技術(shù)原理包括以下4點(diǎn)。編碼磁球用不同配比的兩種紅色分類熒光染料將直徑6.5μm的聚苯乙烯微球染成不同的熒光色，從而獲得多達(dá)100種熒光編碼的微球。共價交聯(lián)將針對不同待測物的抗體/抗原分子或基因探針以共價交聯(lián)的方式結(jié)合到特定的編碼微球上，每個編碼微球都對應(yīng)相應(yīng)的檢測項目。結(jié)合反應(yīng)將針對不同待測物的熒光編碼微球混合，加入待測物質(zhì)或待測的基因擴(kuò)增片段，形成復(fù)合物再與標(biāo)記熒光素發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。激光分析微球在流動鞘液的帶動下單列依次通過紅綠兩束激光，紅激光用以判定微球的熒光編碼，綠激光用以測定微球上報告分子的熒光強(qiáng)度。
2、 流式熒光技術(shù)發(fā)展：1997年，《Clinical Chemistry》雜志刊登專文介紹流式熒光技術(shù)，并將其譽(yù)為“真正的臨床應(yīng)用型生物芯片”。2001年7月27日，INOVA公司的ENA系列產(chǎn)品率先通過美國FDA認(rèn)證標(biāo)志著流式熒光技術(shù)成為首個美國政府許可用于臨床診斷的多指標(biāo)并行檢測技術(shù)。2005年6月9日，基于流式熒光技術(shù)的學(xué)術(shù)論文刊登在《Nature》雜志上。2005年11月，為表彰其對臨床診斷技術(shù)進(jìn)步作出的貢獻(xiàn)，全球科技產(chǎn)業(yè)、行業(yè)研究的權(quán)威機(jī)構(gòu)Frost&Sullivan授予流式熒光技術(shù)“2005年度國際臨床診斷技術(shù)革新大獎”，標(biāo)志著該技術(shù)在國際臨床診斷技術(shù)領(lǐng)域的地位得到了權(quán)威的認(rèn)可。3. 流式熒光技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀：國外研究顯示，流式熒光技術(shù)與傳統(tǒng)ELISA方法檢測自身抗體譜結(jié)果相當(dāng)，總體符合率88.1%到95.2%，可以同時檢測多種抗體，有效的應(yīng)用于臨床實(shí)驗室。根據(jù)2019年美國CAP自身抗體室間質(zhì)評統(tǒng)計，約有56%的用戶用流式熒光的方法檢測ENA抗體譜。國內(nèi)研究顯示，流式熒光技術(shù)檢測干燥綜合征自身抗體的評價，8種抗體的批內(nèi)差異及批間差異均較小，診斷pSS的總敏感度可達(dá)97.2%，總特異性可達(dá)96.34。4. 流式熒光技術(shù)檢測優(yōu)勢：流式熒光技術(shù)有機(jī)整合了熒光編碼微球技術(shù)、計算機(jī)運(yùn)算法則等多項科技成果，具有自由組合、高通量、高速度、低成本、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好、靈敏度高、線性范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。5. 流式熒光技術(shù)檢測項目：國家收費(fèi)目錄中自身抗體有154種，絕大多數(shù)醫(yī)院檢驗科開展50種左右。通過國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械查詢，目前已取得注冊證的應(yīng)用流式熒光技術(shù)的自身抗體檢測項目包括抗核抗體譜、自身免疫性肝病譜、血管炎譜、磷脂譜、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎譜等，可滿足大部分項目的檢測需求。
- 數(shù)碼液相芯片技術(shù)原理：數(shù)碼液相芯片技術(shù)（DLCM）是采用具有不同編碼的磁條碼表面分別包被不同的抗原。與流式熒光技術(shù)比較，其編碼方式及判讀方式不同。根據(jù)樣本中不同抗體的含量不同，不同編碼的磁條碼芯片（對應(yīng)不同的抗原）通過電荷耦合器件顯微成像技術(shù)進(jìn)行兩次明場、暗場成像，可獲得對應(yīng)芯片不同的熒光強(qiáng)度。通過軟件計算分析各編碼芯片的熒光強(qiáng)度，換算成對應(yīng)抗體的濃度或抗體系數(shù)（圖2）。
- 數(shù)碼液相芯片技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀：通過PubMed和中國知網(wǎng)，未檢索到應(yīng)用數(shù)碼液相芯片技術(shù)進(jìn)行自身抗體檢測公開發(fā)表的國內(nèi)外文獻(xiàn)，而較多集中在應(yīng)用該技術(shù)進(jìn)行腸炎病原體、呼吸道病毒等聯(lián)合檢測，是國內(nèi)新興的用于自身抗體譜檢測的多重自動化技術(shù)。
- 數(shù)碼液相芯片技術(shù)檢測項目：通過國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械查詢，目前已取得注冊證的應(yīng)用數(shù)碼液相芯片技術(shù)的自身抗體檢測項目包括抗核抗體譜、自身免疫性肝病譜、肌炎譜、血管炎譜。
多重自動化技術(shù)在自身抗體檢測中的臨床應(yīng)用與展望
流式熒光技術(shù)和數(shù)碼液相芯片技術(shù)均可實(shí)現(xiàn)自身抗體的聯(lián)檢定量及自動化檢測。國家衛(wèi)健委臨床檢驗中心抗核抗體室間質(zhì)評報告顯示，雖然目前應(yīng)用流式熒光技術(shù)和數(shù)碼液相芯片技術(shù)的單位數(shù)量較傳統(tǒng)方法學(xué)少，但是呈現(xiàn)逐年增加的趨勢且都是滿分通過室間質(zhì)評。國內(nèi)流式熒光技術(shù)的應(yīng)用較國外起步晚，如上海透景生命科技股份有限公司的全自動流式熒光發(fā)光免疫分析儀TESMI F4000（2019年上市），配套十六項自身抗體譜檢測試劑盒（流式熒光發(fā)光法）等，可實(shí)現(xiàn)自身抗體譜的聯(lián)合檢測、全自動、可定量及隨到隨檢，滿足自身抗體譜檢測的標(biāo)準(zhǔn)化、自動化、定量化發(fā)展趨勢，能夠更好的服務(wù)于臨床。相信隨著國內(nèi)用戶越來越多，該技術(shù)及平臺也會越來越成熟以及受到更多客戶的認(rèn)可，使得國內(nèi)自身抗體檢測進(jìn)入新的時代！
