欧美h版在线观看_日本精品中文字幕互動交流_欧美亚洲国产91视频_影音先锋AV成人电影_无码Aⅴ免费一区二区三区_国内外个人免费云服务器_cl2023年一二三四五六_视频图片小说亚洲无码_久久婷婷五月综合色国产._免费A级特黄片日韩精品

本文轉載自 戴菁 王學鋒 定向點金 金寶

血友病是常見的遺傳性出血性疾病，分為A（HA）和B（HB）兩型，其發(fā)病原因是凝血因子Ⅷ基因（F8）或Ⅸ基因（F9）缺陷導致蛋白的合成缺陷或質(zhì)的異常，或者兩者兼有之。近年來，隨著實驗室篩選實驗和檢測方法的不斷改進，對輕型血友病患者的診斷率提高，發(fā)病率有所上升。

F8基因位于Xq28，全長186Kb，由26個外顯子和25個內(nèi)含子組成，FⅧmRNA全長約9Kb，編碼了由2351個氨基酸殘基（AA）組成的多肽鏈，FⅧ蛋白分泌入血后，在血液中與血管性血友病因子（vWF）結合，以FⅧ/vWF復合物形式存在，后者可穩(wěn)定FⅧ，防止其過早降解。F8基因不僅結構龐大，而且導致HA的基因突變種類繁多，其中基因內(nèi)含子22倒位突變引起的FⅧ蛋白缺乏，占重型血友病A分子發(fā)病機制的42%；而內(nèi)含子1倒位的發(fā)生率大約占重型血友病A的2~5%，其余幾乎每個家系都有不同的突變。目前，F8基因突變數(shù)據(jù)庫報道的有2015種各種不同的突變，包括點突變、基因缺失、插入、無義突變、剪接突變等，從而提示F8基因異常具有高度的異質(zhì)性；中型和輕型血友病中，86%為錯義突變。

通過基因診斷可以更精準地為血友病患者及其家屬開展優(yōu)生優(yōu)育指導，尤其是對家族中有生育希望及可能的女性進行攜帶者基因檢測，對優(yōu)生優(yōu)育有重要的價值。同時，對血友病患者進行明確的基因診斷有利于接受預防治療的患者更明確地知曉導致疾病的基因類型

1. 血友病A基因診斷常規(guī)流程：

（1）內(nèi)含子倒位的檢測：內(nèi)含子22倒位是20%HA患者的致病突變，是45%重型HA患者的致病突變。內(nèi)含子22倒位是F8基因第22內(nèi)含子內(nèi)的Int22h序列與基因外的兩個與之高度同源的序列（Int22h-2，Int2h-3）之一發(fā)生染色體內(nèi)的同源重組，導致FⅧ基因在外顯子1~22 與23~26間發(fā)生斷裂，不能合成正常的凝血因子FⅧ，導致重型血友病A。內(nèi)含子1倒位是繼內(nèi)含子22倒位后被發(fā)現(xiàn)的另一導致血友病A的重要發(fā)病機制，系內(nèi)含子1內(nèi)的Inth-1與基因外的高度同源的序列Inth-2發(fā)生染色體內(nèi)的同源重組，導致FⅧ蛋白不能正常合成。因此，首先需要對HA患者的F8基因內(nèi)含子22倒位和內(nèi)含子1倒位進行檢測。

（2）F8基因26個外顯子及其側翼序列的基因檢測：分別針對F8基因的共26個外顯子以及5’端和3’端非編碼區(qū)設計特異性引物，運用PCR的方法將上述目的片段進行擴增，隨后采用Sanger法進行基因序列的檢測。使用該方法可以檢測出絕大部分的F8基因突變位點，包括小片段的缺失、插入、點突變（無義突變和錯義突變）、剪切位點突變等。

（3）間接基因診斷：對于HA，由于F8基因不僅龐大且結構復雜，直接查找突變費時費力，故可以采用結合遺傳連鎖分析的間接診斷方法進行血友病A的攜帶者與產(chǎn)前診斷。

2. 血友病B基因診斷流程：由于FⅨ基因較小，可以采用直接的核酸測序方法進行基因突變檢測；F9基因外的6個多態(tài)性位點經(jīng)過多重PCR擴增可用于血友病B的遺傳連鎖分析，但也無法排除基因重組的發(fā)生對其結果的干擾。

3. 特殊血友病患者的基因檢測方法：

（1）拷貝數(shù)檢測：運用上述基因診斷策略基本能對90%以上的HA患者做出明確的基因診斷，但仍有10%左右的患者未能找到明確的突變位點，需要用其他的技術進行診斷

（2）NGS檢測：NGS又稱為二代測序[29]，這是相對于Sanger一代測序而言，是近幾年發(fā)展起來的一種高效率的基因測序方法，其檢測深度和廣度、高通量等特性使得其在臨床上得到了廣泛應用

（3）女性HA的基因診斷：女性HA十分罕見，首先需要注意和血管性血友病（VWD）在表型上進行鑒別；在對F8基因進行檢測后，若能發(fā)現(xiàn)基因缺陷，則對確立女性血友病的診斷具有重要價值

（4）散發(fā)家系：根據(jù)文獻報道，大約1/3的血友病A家系為沒有家族史的散發(fā)家系，對于這些家系，目前主要通過直接診斷和間接診斷相結合的策略。

2. 患者家族對基因診斷的認識：目前所有的檢測技術由于各種原因限制以及基因突變復雜性、異質(zhì)性等特點的影響，均無法達到100%的檢測準確率，隨著檢測技術的不斷發(fā)展，即使是最新的NGS技術用于血友病的基因檢測，仍有患者無法得到明確的基因結果，利用最新的NGS技術結合MIP分子檢測策略，HA和HB的可診斷率分別達到了98.1%和99.3%，但仍然有血友病患者在所有能使用的基因檢測方法后仍無法明確基因異常位點。