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實時熒光PCR技術是新冠病毒核酸檢測的主要方法。每一個標本的檢測結果都會以一張擴增曲線圖呈現，需要我們的“專業(yè)慧眼”去辨析，判斷出“陰性”還是“陽性”。在實際工作中，核酸擴增曲線并非次次“完美”，易受到多種因素影響。因此如何判讀擴增曲線，對準確報告新冠核酸檢測結果至關重要。

曲線特點：

【類型一】某標本內標無S型擴增曲線。

【類型二】外源性內標呈離散型曲線。

原因分析：

a) 標本采樣欠佳，沒有刮取到足夠的鼻咽部細胞。

b) 標本保存不當，核酸降解。

c) 標本加錯位置或漏加。

d) 提取失�。毫呀庖何椿靹颍ㄍ庠葱詢葮耍�、提取儀故障等。

e) 擴增失�。郝┘臃磻�液、模板加錯孔位、混入抑制擴增反應的干擾物等。

解決方案：

a) 重新采集樣本。

b) 送檢標本及時檢測，室溫放置不超過4h。

c) 按照規(guī)范化流程進行相關操作。

d) 定期對在崗人員進行操作考核。

【注】內標擴增曲線異常，則該批或相應標本結果無效，需重新采樣或重新檢測。

曲線特點：軟件默認基線設定的擴增曲線呈波浪型，導致Ct值偏大，可能會被誤判為陰性。

原因分析：軟件默認基線設定不準確造成擴增曲線異常。

解決方案：根據檢測試劑的要求設定適宜的基線。

曲線特點：軟件優(yōu)化后擴增曲線向斜上方抬起，導致Ct減小，根據優(yōu)化后擴增曲線會誤判為陽性，但原始信號未有明顯擴增。

原因分析：根據設定基線，軟件在自動優(yōu)化擴增曲線時會放大微小異常信號。

解決方案：查看原始曲線，對基線稍作調整。

【注】自動優(yōu)化軟件會放大微小的異常信號，可根據原始曲線判斷信號真假。

曲線特點：多個標本出現單靶標通道的擴增曲線翹尾。

原因分析：

a) 反應液配制后保存不當，如熒光探針斷裂。

b) 存在陽性質控污染或者其他熒光物質污染。

c) 擴增試劑/耗材的批間差異導致非特異性擴增增加（如試劑更新后Mg2+濃度過高）。

解決方案：

a) 按照說明書要求保存配制的擴增反應液。

b) 提取得到的核酸應及時進行后續(xù)處理，否則及時封蓋，避免混入陽性質控或其他干擾物；實驗室每天按時清潔消毒以消除潛在的干擾因素。

c) 試劑/耗材批號更換前應進行比對實驗驗證。

曲線特點：標本靶標通道呈低平且非典型S型擴增曲線，標本與弱陽性質控的熒光強度存在顯著差異。

原因分析：

a) 標本存在干擾物質。

b) 提取純化不完全。

解決方案：標本重新檢測，必要時可使用不同的檢測試劑進行確認。

【注】對疑似標本建議使用不同的檢測試劑進行確認。在異常擴增曲線判斷時，應根據整批標本的擴增情況（弱陽性質控擴增曲線）綜合判斷。

曲線特點：反應體系蒸發(fā)，終體積減少，熒光強度產生變化導致陰性擴增曲線整體呈斜向上或山域型。

原因分析：

a) 在擴增過程中因熱蓋導致管蓋爆裂/光學膜破裂。

b) 未蓋緊管蓋/刮緊光學膜。

c) 未使用配套/質量合格的耗材。

解決方案：

a) 定期檢查擴增儀狀態(tài)，確保熱蓋溫度正常。

b) 上機前蓋緊管蓋/刮緊光學膜。

c) 使用廠商推薦的合格擴增耗材。

d) 調整基線可適當糾正蒸發(fā)引起的異常信號，有助于后續(xù)的擴增曲線判讀。

曲線特點：擴增曲線出現劇烈或明顯曲折。

原因分析：反應體系內有大氣泡形成折射，干擾熒光的采集。

解決方案：

a) 加樣時減少氣泡的產生，同時上機前可通過離心減少氣泡。

b) 調整基線可適當糾正氣泡引起的異常信號，有助于后續(xù)的擴增曲線判讀。

曲線特點：所有通道的擴增曲線出現鋸齒狀。

原因分析：擴增儀電壓不穩(wěn)、采光或者濾光片故障。

解決方案：檢查擴增儀電壓和光路系統(tǒng)，及時排除硬件故障，防止后續(xù)檢測的異常結果。若擴增儀故障嚴重影響擴增曲線判讀時應重新檢測。