對尿液中的有形成分進行鏡檢分析,例如紅細胞 (RBC)、白細胞(WBC)、管型、細菌和真菌等,是對相關疾病進行診斷的重要手段。
但尿液標本中無定形結(jié)晶的存在,會對這類有形成分造成嚴重的干擾,而如何解決這種干擾則是臨床實踐中經(jīng)常需要面對的問題。
美國醫(yī)學科學院與西佛羅里達大學的學者們嘗試解決了這個問題,并將成果發(fā)表在Laboratory Medicine(IF:1.865)上。

在收集到的尿液標本中,尤其是經(jīng)過冷藏的尿液標本中,常常會有各種晶體的存在。
許多晶體形成特定的可識別形狀,例如草酸鈣和三磷酸鹽。但有一些尿液中則會形成小而不定形的晶體。在酸性尿液中,這些晶體稱為無定形尿酸結(jié)晶,它們通常是鈉、鉀、鎂、鈣等離子的尿酸鹽結(jié)晶;在堿性尿液中,它們被稱為無定形磷酸結(jié)晶。
盡管無定形晶體通常是非病理性的,但由于其多變的形態(tài)和龐大的數(shù)量,很可能形成類似于細菌或真菌的形狀,從而造成鏡檢的嚴重干擾。
圖1 無定形尿酸結(jié)晶對鏡檢的干擾
A:400倍鏡下的無定形尿酸結(jié)晶;C:當無定形結(jié)晶、真菌、細菌同時存在時,對結(jié)果統(tǒng)計干擾極大。
盡管隨著臨床檢驗自動化水平的提高,國內(nèi)很多醫(yī)療衛(wèi)生機構都已經(jīng)普及了尿有形成分的自動化分析,但自動化分析實際上只是通過算法識別圖像代替了人眼鏡檢,原理上同樣會受到無定形結(jié)晶的干擾。
此外,從宏觀上看,這些不定形結(jié)晶的存在也會使尿液的混濁度增加(圖2)。
圖2 不定形結(jié)晶的存在使尿液標本更加混濁
目前已有研究表明,無定形磷酸鹽可以用2%的乙酸快速溶解,而對無定形尿酸鹽則缺乏相應的研究。因此,找到一種安全、快速溶解尿沉渣中的無定形尿酸結(jié)晶的方案就顯得較為迫切。
也正是出于這一目的,本研究的研究者們嘗試總結(jié)出了一種處理方法來解決無定形結(jié)晶的干擾,并將其總結(jié)成了操作規(guī)程(Protocols),我們?yōu)楦魑蛔x者編譯整理如下:
鑒別標準:當混濁的尿液呈微粉紅色(由于尿中的尿紅素附著)、高比重和酸性 pH 值時,應當懷疑存在無定形尿酸鹽晶體。
操作步驟
1. 預熱樣品:
將10-12mL混合均勻的樣品轉(zhuǎn)移到尿液分析試管中并蓋上蓋子;
將試管置于 60°C 的水浴中 90 秒;
將試管倒置并冷卻到室溫。
注意事項:必須在離心前進行預熱,否則離心形成的沉淀由于密度過大,無法被很好地溶解。
2. 消除或驗證沉渣中的無定形尿酸鹽:
轉(zhuǎn)移10μL懸浮良好的尿沉渣到顯微鏡載玻片上;
加入10μL50mmol/L NaOH,并用移液器吸頭輕輕攪拌;
蓋上蓋玻片并在顯微鏡下或自動化分析儀中進行檢查。
注意事項:如果晶體不能完全溶解,可將標本和NaOH的比例調(diào)整為5μL尿沉渣和15μL NaOH半定量細菌和酵母菌時要考慮稀釋系數(shù)。使用此方法時不能對管型、RBC或WBC進行定量分析。
安全提示:50mmol/L NaOH溶液(0.2%)是弱堿,它的NFPA(美國消防協(xié)會)健康等級為1,被認為具有低傷害風險。可以直接購買此濃度的試劑,也可以選擇從10%NaOH儲備試劑溶液進行制備。NaOH是一種強堿,可能導致嚴重燒傷和眼部損傷。使用時應采取眼部和面部保護措施,儲存和制備試劑時,請務必閱讀安全操作規(guī)范。
在選取了207份成年人的尿液標本,并選取了其中56份存在無定形結(jié)晶的標本進行重復試驗后,研究者認為這一處理方法能夠去除尿液標本中絕大多數(shù)的無定形尿酸結(jié)晶,效果良好。(圖3)
圖3 經(jīng)過處理后的標本編號為12的尿液標本400倍鏡下視野對比
A. 未經(jīng)處理的12號尿液標本;B. 用50mmol/L NaOH處理后的12號尿液標本,提示細菌存在;C. 含有無定形晶體、酵母和細菌的尿沉渣;D. 用50mmol/L NaOH 處理后,很容易看到細菌和酵母。
不過,研究者也特別指出,由于這一濃度下的NaOH會對細胞形態(tài)造成影響,因此紅細胞、白細胞、管型等有形成分不應該使用這種處理方法來進行檢查。