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檢驗科每天都要檢測非常多的血常規(guī)標(biāo)本，其中血小板計數(shù)是常用的止凝血功能篩查指標(biāo)之一。在使用血液分析儀進(jìn)行血小板（PLT）計數(shù)時，當(dāng)出現(xiàn)數(shù)量圖形異�；驁缶崾�，應(yīng)使用顯微鏡或者流式細(xì)胞儀對血小板計數(shù)進(jìn)行復(fù)核。ICSH（國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會）推薦流式細(xì)胞術(shù)作為血小板計數(shù)參考方法，并用于其他計數(shù)方法的溯源。 參考方法是一種什么方法？ 參考方法是一種可清楚和準(zhǔn)確描述的用于特定檢測的技術(shù)，該技術(shù)要有依據(jù)，可提供高度準(zhǔn)確和精密的實驗數(shù)據(jù)以評價其他實驗方法檢測結(jié)果的有效性。 流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行PLT計數(shù)的原理是什么？ EDTA抗凝血標(biāo)本中血小板用血小板特異的熒光抗體進(jìn)行染色，用流式細(xì)胞儀檢測紅細(xì)胞（RBC）和PLT比值，再用RBC計數(shù)值除以RBC/PLT比值計算出PLT計數(shù)值。 做PLT計數(shù)參考方法實驗前應(yīng)注意什么？ 01 標(biāo)本中不能有肉眼可見的溶血或小凝塊，室溫下4小時內(nèi)完成檢測。實驗前輕柔地充分混勻標(biāo)本，保證RBC和PLT分布的均一性。 02 PLT約2μm左右，流式細(xì)胞儀對FITC標(biāo)記直徑為2μm的球形顆粒時必須有足夠的敏感度。 實驗中還需要注意什么? ●在標(biāo)本檢測中使用聚丙烯或聚苯乙烯容器，不得使用玻璃容器，避免血小板黏附于容器上。 ●使用FITC標(biāo)記的CD41和CD61抗體，這兩種抗體可以與血小板膜糖蛋白GPIIb和IIIa形成復(fù)合物，用于檢測PLT。需確認(rèn)抗體可以將PLT從噪聲、碎片和RBC中分辨出來。 ● 用流式細(xì)胞儀檢測時，應(yīng)至少檢測5000個信號，其中PLT（下圖R1門所示）應(yīng)多于1000，儀器設(shè)定保證每秒少于3000個信號。對于同時收集到RBC散射光和PLT熒光信號（下圖R4門所示），應(yīng)被視為重疊，計數(shù)結(jié)果將分別計入RBC和PLT。 實驗后如何計算得出血小板計數(shù)？ ①紅細(xì)胞濃度計數(shù)具體參照中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/-845-2005年紅細(xì)胞和白細(xì)胞計數(shù)參考方法。 ②用RBC數(shù)除以RBC/PLT的比值得到PLT計數(shù)值。 ③要求PLT計數(shù)參考方法檢測結(jié)果的不精密度（CV）≤3%。 如果PLT計數(shù)不正確，可能的原因是什么？ ●此方法僅得出PLT和RBC比值，要獲得PLT計數(shù)正確結(jié)果，還應(yīng)同時保證RBC計數(shù)準(zhǔn)確性。 ●下表列出PLT計數(shù)參考方法潛在的干擾情況：  |