25-羥基維生素D行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中測(cè)定方法有三種

1、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法 (LC-MS/MS)

LC-MS/MS結(jié)合了液相色譜的高分離性和質(zhì)譜儀很強(qiáng)的分離鑒定的能力，被國(guó)際公認(rèn)為檢測(cè)25-羥基維生素D的“金標(biāo)準(zhǔn)”。LC-MS/MS能夠同時(shí)分別測(cè)定25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3的濃度，具有高靈敏度、高特異性和高精準(zhǔn)度等特點(diǎn)。但儀器操作復(fù)雜，對(duì)檢驗(yàn)人員的專業(yè)度要求高，儀器昂貴，通量低，一般普通的醫(yī)院檢驗(yàn)科無(wú)法達(dá)到要求。

此方法主要適用于：

（1）初篩檢測(cè)結(jié)果與臨床情況不符合，需要精確定量的患者

（2）需要進(jìn)行25-羥基維生素D2、D3分型定量的患者

（3）補(bǔ)充維生素D效果不理想的患者

（4）其他需求質(zhì)譜法精確定量的患者

2、化學(xué)發(fā)光免疫法

化學(xué)發(fā)光法將化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與免疫技術(shù)相結(jié)合，使用連接有魯米諾或吖啶酯衍生物的25-羥基維生素D與待檢測(cè)樣品中25-羥基維生素D競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合包被了25-羥基維生素D特異性抗體的磁珠，反應(yīng)終止后加入激發(fā)劑，使用光電倍增管檢測(cè)產(chǎn)生的化學(xué)熒光信號(hào)。

由于其操作簡(jiǎn)單、快速、無(wú)同位素污染且容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，具有高靈敏度、干擾因素少、準(zhǔn)確度高、能自動(dòng)化批量操作、可控性強(qiáng)，適用于大規(guī)模的25-羥基維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況的監(jiān)測(cè)，但化學(xué)發(fā)光法需要配備特定的自動(dòng)免疫分析儀，且只能測(cè)出25-羥基維生素D總的濃度。綜合來(lái)看，化學(xué)發(fā)光法仍然是目前臨床使用的主流方法�？捎糜诔醮魏Y查。

3、酶聯(lián)免疫法(ELISA)

ELISA 法是將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到固相載體上，樣本中 25-羥基維生素D與其抗體結(jié)合，最后根據(jù)酶催化底物生成的有色產(chǎn)物顏色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

ELISA法容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作，在節(jié)省人力、減少污染方面具有一定的優(yōu)勢(shì)，適合于在常規(guī)臨床實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展。但是不能區(qū)分25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3，ELISA法基質(zhì)敏感性，容易與其他非目標(biāo)化合物發(fā)生交叉反應(yīng)，降低檢測(cè)的特異性，且酶促反應(yīng)的結(jié)果受到反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間及加樣準(zhǔn)確性等因素的影響較大。

其他方法:

放射免疫法 (RIA)

RIA 法應(yīng)用廣泛，于 1985年首次提出，是最經(jīng)典的測(cè)定 25-羥基維生素D水平的方法。該方法使用放射性核素(125I)標(biāo)記的 25-羥基維生素D作為示蹤劑，與待測(cè)樣品中的 25-羥基維生素D競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合抗體。RIA法應(yīng)用廣泛，對(duì)儀器要求較低，檢測(cè)方法方便、準(zhǔn)確度好，兼具靈敏度高和特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。但是RIA法不能區(qū)分檢測(cè)25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3，且存在放射性污染，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境都有危害，放射性廢棄物的處理也十分復(fù)雜。

高效液相色譜法 (HPLC)

HPLC法最初采用正相色譜分離技術(shù)，利用硅膠柱分離，現(xiàn)多使用反向色譜。HPLC方法的特點(diǎn)在于能夠有效地分離25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3，同時(shí)檢測(cè)兩者的濃度水平，分析速度快、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。HPLC法的主要缺點(diǎn)是樣品需求量大，樣品處理復(fù)雜，通量小，儀器設(shè)備花費(fèi)較高且需要專業(yè)人員操作，現(xiàn)已逐漸被LC-MS/MS代替。

膠體金免疫層析法

兒童是維生素D缺乏的主要群體之一，但是兒童血管纖細(xì)，依從性差，采集靜脈血不是那么容易，市場(chǎng)上可見(jiàn)用膠體金原理采集末梢血檢測(cè)維生素D的方法，雖然操作簡(jiǎn)便快捷、但存在方法學(xué)的局限性。