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血培養(yǎng)檢驗(yàn)中常見的10大問(wèn)題,你想知道的都在這!血培養(yǎng)瓶陽(yáng)性報(bào)警,革蘭染色涂片查見細(xì)菌,但轉(zhuǎn)種血瓊脂平板,巧克力瓊脂平板,麥康凱培養(yǎng)基未見細(xì)菌生長(zhǎng),可能有以下幾種情況: 第一種:延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間(對(duì)于某些生長(zhǎng)緩慢的革蘭陰性桿菌)血培養(yǎng)陽(yáng)性瓶轉(zhuǎn)種后,實(shí)驗(yàn)室一般培養(yǎng)24-48h后觀察其生長(zhǎng)情況,只能滿足大多數(shù)細(xì)菌,但是忽略了一些生長(zhǎng)緩慢的細(xì)菌(如軍團(tuán)軍屬,布魯菌屬和二氧化碳嗜纖維菌)碰到該情況應(yīng)該把培養(yǎng)物置二氧化碳培養(yǎng)箱延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間,最多可以是2-4周。 第二種:需要添加營(yíng)養(yǎng)成分和特殊生長(zhǎng)因子,例如乏養(yǎng)菌屬和顆粒鏈菌屬可轉(zhuǎn)種含有維生素B6、半胱氨酸及營(yíng)養(yǎng)成分高的血瓊脂平板,可以種衛(wèi)星試驗(yàn)。 第三種:營(yíng)養(yǎng)要求高(上述情況還不生長(zhǎng))可以用血培養(yǎng)瓶肉湯配制培養(yǎng)基。 血培養(yǎng)瓶陽(yáng)性報(bào)警后,抽取培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)肉湯直接涂片革蘭染色鏡檢。鏡檢找不到細(xì)菌,也可以通過(guò)分離膠促凝管對(duì)細(xì)菌進(jìn)行離心富集,然后取離心后分離膠上面的灰白色沉淀進(jìn)行革蘭染色,或者再采用瑞氏染色后鏡檢。若仍未查見細(xì)菌,且儀器沒有生長(zhǎng)曲線表現(xiàn),可以認(rèn)為是假陽(yáng)性。 血培養(yǎng)儀器不報(bào)警,但是培養(yǎng)物查見細(xì)菌,轉(zhuǎn)種平板也有細(xì)菌生長(zhǎng),即為假陰性。 革蘭陽(yáng)性球菌的鏡下形態(tài)完整,邊緣清晰,染色均勻;而染液沉渣的形態(tài)各異并且邊緣模糊,染色不均。轉(zhuǎn)動(dòng)顯微鏡微調(diào)焦距,細(xì)菌沒有折光性,而沉渣則相反。白細(xì)胞核的形態(tài)多樣,結(jié)構(gòu)有疏松和致密之分,染色深淺不均;而酵母菌呈圓形或卵圓形,染色均勻。 如果血培養(yǎng)陽(yáng)性報(bào)警,且有生長(zhǎng)曲線,就一定有細(xì)菌生長(zhǎng)。由于有些細(xì)菌與染液沉渣混在一起,不易分辨,可以通過(guò)分離膠促凝管對(duì)細(xì)菌進(jìn)行離心富集,然后取離心后分離膠上面的灰白色沉淀進(jìn)行革蘭染色。或者重新取陽(yáng)性血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)物涂片做瑞氏染色。在瑞氏染色涂片中可以保持細(xì)胞的完整性,沒有過(guò)多的細(xì)胞碎渣干擾鏡檢,易查見形態(tài)清楚的染色為藍(lán)紫色的細(xì)菌,但是瑞氏染色不能分辨病原菌的陰陽(yáng)屬性。可以根據(jù)革蘭染色背景判斷是革蘭陽(yáng)性還是陰性菌。 兩瓶血培養(yǎng)出現(xiàn)一瓶陽(yáng)性,一瓶陰性,應(yīng)首先分析細(xì)菌的種類。若檢出皮膚定植菌,一般考慮是污染菌;若檢出革蘭陰性桿菌傾向于感染;若陽(yáng)性瓶檢出的是金黃色葡萄球菌或其他條件致病菌,需要與臨床醫(yī)生和實(shí)驗(yàn)室人員相互溝通,綜合分析建議重復(fù)采血培養(yǎng)。若兩瓶均為陽(yáng)性但檢出不同細(xì)菌,如分別為陽(yáng)性桿菌,微球菌時(shí),可認(rèn)為是污染菌;若是革蘭陽(yáng)性球菌如CNS和陽(yáng)性桿菌傾向于污染,建議重復(fù)采血培養(yǎng);相反若其中一瓶為金黃色葡萄球菌或大腸埃希菌等,另一瓶為皮膚定植菌,應(yīng)及時(shí)和臨床醫(yī)生溝通。 如果遇到兩瓶血培養(yǎng)結(jié)果均為陽(yáng)性,兩瓶的菌種鑒定結(jié)果一致,均為兩種細(xì)菌,應(yīng)考慮復(fù)數(shù)菌感染。如遇到兩瓶中只有一瓶檢出2種細(xì)菌,應(yīng)及時(shí)與臨床溝通。 對(duì)于實(shí)驗(yàn)室無(wú)法鑒別的細(xì)菌,首先要結(jié)合臨床和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)判斷是否為病原菌。若為病原菌,應(yīng)根據(jù)細(xì)菌的鏡下形態(tài)和革蘭染色結(jié)果進(jìn)行初步藥敏試驗(yàn),盡快將藥敏的初步結(jié)果告知臨床。在報(bào)告上注明需要注明需要進(jìn)一步鑒定,然后做進(jìn)一步鑒定。根據(jù)染色情況可以進(jìn)一步加做生化試驗(yàn)。如果有條件可采用質(zhì)譜或分子生物學(xué)方法進(jìn)行鑒定或送上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室鑒定。 首先要確認(rèn)血培養(yǎng)瓶里有幾種細(xì)菌生長(zhǎng)。多種細(xì)菌生長(zhǎng)的時(shí)候,可能報(bào)陽(yáng)后涂片的細(xì)菌與轉(zhuǎn)種后涂片的細(xì)菌不是同一種細(xì)菌,細(xì)菌形態(tài)肯定不一致。出現(xiàn)有復(fù)合細(xì)菌生長(zhǎng)應(yīng)該對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行涂片確認(rèn)。如果是單一細(xì)菌生長(zhǎng),涂片形態(tài)不一致,應(yīng)考慮細(xì)菌在肉湯或瓊脂上生長(zhǎng),其生長(zhǎng)環(huán)境有差異,可能會(huì)有此情況,但該種情況很少出現(xiàn)。另外出現(xiàn)錯(cuò)誤是會(huì)把細(xì)菌的陰陽(yáng)性弄混淆,例如肺炎克雷伯菌會(huì)染色為陽(yáng)性球菌。發(fā)生這樣的情況主要原因是實(shí)驗(yàn)室沒有堅(jiān)持每天做室內(nèi)質(zhì)控,必要時(shí)可以采用鮑曼不動(dòng)桿菌和腸球菌的混合菌株進(jìn)行質(zhì)控染色。 血液和其他正常無(wú)菌體液培養(yǎng)檢測(cè)中涉及的許多變量實(shí)際無(wú)法控制,血培養(yǎng)并不能完全體現(xiàn)病原菌在人體的生存狀況。因而血培養(yǎng)無(wú)法提供完全置信度。 1、血液標(biāo)本中白細(xì)胞數(shù)量過(guò)多,細(xì)胞在溶解中可以釋放出二氧化碳。則可能提示培養(yǎng)瓶陽(yáng)性。 2、血液中的微生物數(shù)量一般微乎其微,可能斷斷續(xù)續(xù)出現(xiàn),因此應(yīng)該從患者體內(nèi)連續(xù)采集血樣。 3、血培養(yǎng)瓶陽(yáng)性報(bào)警,應(yīng)該迅速處理,以避免可能自溶或其他原因?qū)е碌臒o(wú)活力培養(yǎng)物。例如肺炎鏈球菌極易溶解。 4、抗凝劑聚茴香腦磺酸鈉(SPS)能夠中和溶菌酶,抑制吞噬作用,使部分氨基糖苷類失活,抑制部分補(bǔ)體串聯(lián)。但是SPS會(huì)抑制部分細(xì)菌生長(zhǎng),如流感嗜血桿菌、腦膜炎奈瑟球菌、淋病奈瑟球菌、厭氧消化鏈球菌以及卡他莫拉菌。所以建議懷疑上述細(xì)菌時(shí)不選用此類培養(yǎng)方法。腦脊液不建議使用血培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。 1、需氧瓶長(zhǎng)厭氧菌 主要是因?yàn)楝F(xiàn)在的需氧瓶中都添加了L-半胱氨酸,是特殊細(xì)菌的生長(zhǎng)因子。同時(shí)L-半胱氨酸還是一種具有還原性的氨基酸,在培養(yǎng)基中會(huì)耗掉部分氧氣,導(dǎo)致氧化還原電勢(shì)降低,從而適合某些對(duì)氧不嚴(yán)格的厭氧菌的生長(zhǎng)。 另外一個(gè)原因是有些感染很重的患者,血氧飽和度低,加之白細(xì)胞高,劇烈的呼吸作用消耗過(guò)多的氧氣,導(dǎo)致血培養(yǎng)瓶中氧氣缺乏,電勢(shì)降低。此時(shí)厭氧菌也能生長(zhǎng)。 2、厭氧瓶生長(zhǎng)專性需氧菌 在整個(gè)血培養(yǎng)瓶的研發(fā)個(gè)過(guò)程中為了厭氧瓶不漏檢,會(huì)在培養(yǎng)基中加入一定濃度的精氨酸和硝酸鐵,這兩樣物質(zhì)可以替代氧氣作為呼吸作用中氧化磷酸化電子傳遞的終末受體,此時(shí)即使沒有氧氣的存在,需氧菌的呼吸作用依然能順利進(jìn)行,細(xì)菌依然能通過(guò)替代途徑獲取能量。因此,需氧菌在厭氧瓶?jī)?nèi)是可以生長(zhǎng)的。 血培養(yǎng)檢驗(yàn)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,要善于在平時(shí)積累經(jīng)驗(yàn),要對(duì)日常中發(fā)現(xiàn)的情況多問(wèn)個(gè)為什么。同時(shí)在整個(gè)檢驗(yàn)過(guò)程要注意基本操作,堅(jiān)持每日的室內(nèi)質(zhì)控。 只有把小事都做好了,才能夠最終有一個(gè)好的結(jié)果,本文中有許多問(wèn)題的解決方式是我本人在日常工作中的經(jīng)驗(yàn)積累,沒有得到任何官方認(rèn)證,請(qǐng)大家多多批評(píng)指正。 【參考文獻(xiàn)】 1徐英春. 臨床微生物學(xué)血培養(yǎng)操作規(guī)范[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2004, 27(2):124-126. 2 卜靜雅, 馬超超, 寧安紅,等. 陽(yáng)性血培養(yǎng)涂片結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不一致的原因探討[J]. 中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志, 2017(12):1452-1455. |