目前,隨著人們對自身的健康狀況越來越重視,HBsAg檢測結果的準確性顯得尤為重要。國內(nèi)大多數(shù)臨床檢驗實驗室進行HBsAg血清學檢測最為常用的方法是酶聯(lián)免疫法,按照試劑盒說明書說明當檢測信號吸光度值(A)超出試劑盒設定的陽性判斷值時,即判為陽性,反之則判為陰性。由于影響酶聯(lián)免疫測定的因素有很多,這些報告對于強反應性和明顯陰性的標本,造成錯誤結果的可能性較小,但對處于陽性判斷值周圍的弱陽性反應性標本則可能影響較大,就可能會產(chǎn)生假陽性或假陰性的結果,這些結果可能會影響檢驗人群身心健康,還可能引發(fā)不必要的醫(yī)療糾紛。因此,臨床實驗室要重視對感染性疾病血清學標志物檢驗中弱陽性反應性標本的確認及報告解釋。血清是最常見的ELISA標本,大約有40%的人血清標本含類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、嗜異性抗體嗜靶抗原、自身抗體等非特異性物質(zhì)。它們的存在對ELISA測定有干擾作用易造成假陽性結果,應該在不同時期多次采血以減少假陽性率。⑴標本溶血:各種人為因素引起標本溶血,使細胞內(nèi)過氧化物酶進人血漿,并吸附于細胞及纖維蛋白原上,增加加樣后微孔板洗滌難度,引起HRP活性增高,造成非特異性顯色。有研究發(fā)現(xiàn)溶血標本OD值較高,且與溶血程度成正比;⑸比色時間:有研究顯示雙波長法比色,延遲10 min或更長時間比色,結果有不同程度的“高檢出”現(xiàn)象,因此檢測應保證終止顯色后及時比色;⑹人為因素:試劑因素、加樣不準確、孵育溫度及時間、洗板次數(shù)、顯色液的加入方式、標本有污染和操作不熟練等。對弱陽性反應標本的雙份復檢可以減少報告的誤診和漏診,但是仍有一些標本需要確認實驗才能確認。弱陽性反應標本有一定的傳染性,應加以重視。如果忽視弱陽性反應結果尤其是陽性判斷值附近的結果,易造成低濃度HBsAg表達人群的漏檢和高濃度類風濕因子等因素引起的誤診。在目前尚沒有對臨界結果有統(tǒng)一規(guī)則之前,除選擇質(zhì)量較好的試劑,對定性檢測過程進行標準化以減小實驗誤差外,還應根據(jù)實驗結果設立合適灰區(qū)和弱陽性反應標準,對弱陽性反應樣本進行嚴格復檢和確認實驗。如若遇到HBsAg測定結果為弱陽性反應的樣本,應通過雙份復檢或確認實驗來確定,復檢可以減少外源性干擾,復檢結果不一致的再做確認實驗,其目的是要排除內(nèi)源性的干擾因素,有條件的單位可采用定量或者HBV DNA檢測來綜合分析報告。總之,檢驗工作者必須對弱陽性反應標本加以重視,減少漏診誤診。要做好HBsAg檢測工作,提高檢測質(zhì)量,必須選擇國家衛(wèi)生部批檢合格試劑盒;標本空腹采集無溶血,血清完全分離;操作嚴格按說明書操作規(guī)程進行;臨床檢驗各室應根據(jù)目的不同、項目不同分別采血,防止轉(zhuǎn)血過程中標本污染可能,導致結果錯誤的發(fā)生;對于陽性標本或可疑標本采用不同廠家不同方法及重新采血復查。而現(xiàn)階段由于方法學特定的局限性及試劑盒客觀存在的質(zhì)量差異,抗原抗體結合有一定線性區(qū)、等價區(qū)和抗原過剩區(qū),只有當HBsAg濃度在線性范圍內(nèi),S/CO值與HBsAg濃度呈正相關,故臨床報告化驗單時,不宜單純報告陰、陽性(質(zhì)控標本除外),且建議臨床規(guī)范化驗單,臨床醫(yī)生在化驗單上詳細注明患者病情和分期。
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