本文轉(zhuǎn)載自檢驗君 定向點金 金寶
為了提高臨床檢驗的工作效率和操作水平，本文基于有關(guān)工作經(jīng)驗談?wù)勗谂R床生化檢驗中遇到的一些常見問題以及一些認(rèn)識和看法。
一、導(dǎo)致生化項目校準(zhǔn)結(jié)果不良的因素
（1）光源燈老化導(dǎo)致儀器發(fā)光不穩(wěn)定造成酶類試驗項目重復(fù)性不良；（2）孵育系統(tǒng)臟污產(chǎn)生的隨機誤差；（4）試劑針、樣品針及其密封墊老化造成加樣不準(zhǔn)引起校準(zhǔn)結(jié)果不良；（5）清洗機構(gòu)滴水或堵塞造成交叉污染引起結(jié)果不良。（1）試劑劣化引起試劑空白吸光度值變化而造成試劑反應(yīng)效能不良；（2）校準(zhǔn)品失效引起校準(zhǔn)結(jié)果靈敏度喪失—標(biāo)示值和實際值之間的吸光度存在差距。當(dāng)出現(xiàn)測試結(jié)果不良的情況時，首先要分析是所有項目結(jié)果不良還是個別項目結(jié)果不良；結(jié)果不良的項目是否存在規(guī)律性；是采用速率法還是終點法分析的項目；是采用單試劑的還是雙試劑的項目。然后再做針對性的進(jìn)一步分析:1、由光路因素造成的結(jié)果不良，現(xiàn)象：速率法酶類項目(主波長340nm)結(jié)果混亂。原因分析:2、由加樣系統(tǒng)故障造成的結(jié)果不良，現(xiàn)象:結(jié)果偏低或高，或為零，或為負(fù)值。原因分析:(2)水平相對位置有偏移導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)；(6)樣品針高度不合適會引起SAMPLESH0T的報警；(7)樣品針高度不夠，采集不到樣品，引起項目結(jié)果為零或負(fù)值。
（1）試劑變質(zhì)失效將會使反應(yīng)曲線不良；（2）試劑間存在交叉污染也會造成測試結(jié)果不良；（3）此外，還要檢查在更換試劑后，測光點、反應(yīng)方向、上下界線等參數(shù)的設(shè)置是否正確。（1）如果單試劑的項目結(jié)果不良，攪拌棒1可能有問題；（2）如果雙試劑的項目結(jié)果不良，攪拌棒1和2都可能有問題；（3）當(dāng)攪拌棒位置偏移或旋轉(zhuǎn)不良，導(dǎo)致反應(yīng)不充分，也會造成結(jié)果不良。5、由清洗機構(gòu)造成的結(jié)果不良。
（1）管路真空不良致使廢液吸不干凈造成結(jié)果不良；（2）管路堵塞后造成管路滴水、溢水也會導(dǎo)致結(jié)果混亂。
三、全自動生化儀雙試劑項目中出現(xiàn)R1、R2液不能匹配的原因分析
雙試劑項目一段時間做下來后，試劑盒中就會出現(xiàn)R1與R2不能匹配情況，原因是加試劑時試劑針都有附加余量，而且隨加的試劑量不同，附加余量也不同；以日立儀器為例，在日立生化儀（如7060）操作手冊上有個關(guān)于“為防止試劑被稀釋，在每次吸取試劑時再吸取一定的余量加在設(shè)定量上”的表格如下:
舉個例子,做ALT項目,反應(yīng)試劑參數(shù),R2為50μl,R1為200μl,R2:R1=1:4
日立7060生化儀實際做時R2要吸掉63μl,R1吸掉223μl,R2:R1=1:3.54，這個吸樣比例與實際需要的比例(試劑盒標(biāo)示的比例)失衡！時間一久，就會造成R2已經(jīng)用完而R1還剩余很多的情況。交叉污染是生化儀使用中常見的現(xiàn)象，簡單理解為在A項目測定中所使用的試劑、樣本、反應(yīng)產(chǎn)物、清洗劑等對B項目的測定產(chǎn)生了不良影響的現(xiàn)象，A項目和B項目不一定是相鄰項目。在臨床實驗中偶爾會遇到個別臨床標(biāo)本其CKMB的檢測結(jié)果與CK的結(jié)果不相符，CK的結(jié)果在正常范圍，而CKMB的檢測結(jié)果卻明顯偏高，甚至出現(xiàn)CKMB的結(jié)果大于CK的現(xiàn)象，分析原因如下：主要表現(xiàn)為試劑污染或使用已過有效期的試劑。
市面上CKMB的校準(zhǔn)品或質(zhì)控品較少見，而且其價格也較其他酶類校準(zhǔn)品高得多。因此，一般醫(yī)院都未使用CKMB校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，而是采用廠家試劑盒使用說明書提供的理論因素，在理論因素設(shè)置時，不同儀器略有差異。
肌酸激酶CK是由B、M兩種不同亞基組成的二聚體，所以CK有三種同工酶即CKMM、CKMB、CKBB。CKBB主要存在于腦組織、胃腸道及子宮平滑肌中，腦組織中幾乎全為CKBB，CKMB主要存在于心肌組織中，CKMM主要存在于骨骼肌組織中。在正常人血清中幾乎無CKBB或極微量。理論上CKMB的活性是不可能大于CK活性的。目前常用的檢測CKMB的方法是免疫抑制法，出現(xiàn)CKMB＞CK的情況就是可能由這種方法的檢測原理造成的。在人體中正常情況下CKBB很少，可忽略，而免疫抑制法就是建立在忽略CKBB的基礎(chǔ)上的。即用抗CKM單體的抗體將M亞基完全抑制，所以CKMM會失去活性，而CKMB活性會失去一半，這樣測出的活性實際就是CKMB的一半，所以CKMB的活性應(yīng)該為測定的2倍。但如果存在CKBB就會使結(jié)果偏高，即測定的CKMB活性= CKMB＋2CKBB。如果CKBB＞CKMM，由于結(jié)果要乘2，也就是說2CKBB＋CKMB＞CKBB＋CKMB＋CKMM，即測得的CKMB活性＞CK活性。
因紅細(xì)胞內(nèi)含有大量的腺苷酸激酶（AK）從而催化ADP反應(yīng)生成ATP而引起NADPH的吸光度的改變，使CK和CKMB測定結(jié)果假性偏高。CKMB是CK-B×2，假性偏高較CKMM更明顯，同時CKMB參考范圍較小，可能出現(xiàn)CKMB大于CK或CK結(jié)果在正常范圍內(nèi)，而CKMB結(jié)果卻明顯偏高。
來源：檢驗星空
