新型冠狀病毒屬于β屬冠狀病毒，是一種單鏈RNA病毒，其基因組易發(fā)生突變，而采用多靶標檢測方法（如ORF1ab基因、N基因、E基因、S基因），可減少由于基因突變引起的漏檢以及交叉反應引起的假陽性。國家衛(wèi)健委印發(fā)《新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術(shù)指南（第七版）》文件中，也推薦選用針對新型冠狀病毒的ORF1ab、N基因作為檢測雙靶標。然而，在我們平常的檢測工作中，經(jīng)常會遇到用雙靶標試劑進行檢測而結(jié)果卻出現(xiàn)單基因“翹尾”（擴增曲線為非典型S型且CT值較高）的情況。遇到這種情況該如何判讀結(jié)果呢？下面分享一下本人在邊境地區(qū)大規(guī)模新冠核酸檢測工作中遇到的一例單基因“翹尾”案例（如圖1）。
如圖所示，該結(jié)果為單基因ORF-1ab“翹尾”，CT值為35.82。當日的所有檢測結(jié)果均為陰性，只有該樣本出現(xiàn)了“翹尾”，所以排除了實驗室污染的情況。且該孔也不在陽性質(zhì)控孔的附近，推測陽性質(zhì)控污染的可能性也不大。
本次檢測使用A、B兩個品牌的擴增試劑，根據(jù)試劑說明書要求，結(jié)果出現(xiàn)CT值<40的情況需對標本進行復查。為了避免出現(xiàn)假陰性或者假陽性，我們使用了雙試劑對該標本進行復查，同時也將第一次提取的核酸重新點樣檢測，結(jié)果如圖2至圖7。
復查結(jié)果顯示：第二次提取的核酸，用A品牌擴增試劑檢測仍然存在ORF-1ab“翹尾”的情況，用B品牌擴增試劑檢測結(jié)果都是陰性；用第一次提取的核酸重新點樣檢測，A品牌擴增試劑檢測結(jié)果為陰性，B品牌擴增試劑檢測結(jié)果則出現(xiàn)了N基因“翹尾”，結(jié)果之間存在不一致性。那為什么會出現(xiàn)這種情況呢？為了防止出現(xiàn)漏檢的情況，結(jié)合《新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術(shù)指南（第七版）》文件中的陽性判斷標準，需要重新采集樣本并用靈敏度更高的試劑進行檢測。因此，我們聯(lián)系了當?shù)匾咔榉揽刂笓]部，后經(jīng)查實該病人之前是新型冠狀病毒肺炎確診病例，經(jīng)過隔離治療之后，符合國家衛(wèi)生健康委發(fā)布的新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第九版）出院及解除隔離的標準，已經(jīng)解除隔離了。
了解完該病人的情況后，我查閱了相關(guān)的資料：其中提到，出院患者的病毒核酸檢測再次陽性，其檢測到的未必是活病毒，也可能是病毒的基因片段，迄今為止尚未在“復陽”患者的標本中分離培養(yǎng)出活病毒，且有研究顯示目前未發(fā)現(xiàn)復陽患者周圍人群感染情況。結(jié)合這些資料進行分析，該病人體內(nèi)可能有新冠病毒基因片段殘留，且病毒載量少，不易檢出，而不同新冠病毒核酸檢測試劑包含有不同靶標基因位點，檢測敏感性、特異性不同，試劑中酶、金屬離子等成分質(zhì)量差異也會影響檢測結(jié)果，導致復查結(jié)果存在一些差異性。在當前疫情嚴峻的情況下，實驗室對于新冠核酸檢測陰陽性的判斷應慎重，遇到單基因“翹尾”時，應當結(jié)合試劑說明書來判讀結(jié)果，或進行復查，進一步降低假陰性率，快速準確地出具新冠病毒核酸檢測結(jié)果，保障目前疫情防控。[1]《新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術(shù)指南（第五版）》[2] 國家衛(wèi)生健康委.新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第九版）[3] 國家衛(wèi)生健康委.新型冠狀病毒肺炎防控方案（第九版）[4] 馮春森，裴家強，陳燕紅，熊智勇，黃廣濤，曹國強，游波 新型冠狀病毒肺炎復陽患者的臨床特點、預后及傳染性［J］重慶醫(yī)學，2021,50（6）：945-948[5] 張文佳,廖璞.1 例新型冠狀病毒肺炎多次核酸檢測異同結(jié)果的原因分析[J].重慶醫(yī)學,2020,49(17):2834-2836.